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ELISA試劑盒測量結(jié)果不準確,哪些因素導致的

更新時間:2019-12-25點擊次數(shù):1241
   Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

ELISA試劑盒


  ELISA試劑盒測量有時會出現(xiàn)測量結(jié)果不準確現(xiàn)象,這是怎么回事呢?是什么因素導致測量結(jié)果受影響的呢,一起來了解一下吧!
  1.樣本因素
  標本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復凍融等。
  2.試劑因素
  不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴格執(zhí)行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應當小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復凍融造成試劑的失效。
  3.操作因素
  ELISA操作步驟復雜,操作不當將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
  4.方法學的影響
  ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的競爭等因素的影響,結(jié)果重復性較差,質(zhì)量較難控制。
  5.標本復查
  ELISA手工檢測過程復雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復查力度是保證結(jié)果準確性的可靠方法,比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結(jié)果進行復查。
  6.灰區(qū)的設置
  通常情況下,ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
  7.常表示結(jié)果的常用方法
  a.定性測定
  b.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
  c.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定,繪制標準曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。
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